摘要：為探究鰤?mèng)~諾卡氏菌(Nocardia seriolae)強(qiáng)毒株LY20810 F1與其傳代弱毒株LY20810 F110的特性差異,比較了兩個(gè)菌株的生物學(xué)特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鱸免疫反應(yīng)的差異,并評(píng)價(jià)了弱毒株LY20810 F110對(duì)大口黑鱸的免疫保護(hù)效果。結(jié)果表明,通過(guò)BHI培養(yǎng)基連續(xù)傳代培養(yǎng)110代次后,菌株LY20810 F110的菌落、菌體形態(tài)發(fā)生顯著變化,其生長(zhǎng)速度較原始毒株LY20810 F1快1倍以上。通過(guò)比較兩株菌的10個(gè)毒力基因序列,發(fā)現(xiàn)菌株LY20810 F110的SodC和ESAT6基因發(fā)生了單位點(diǎn)突變。致病力測(cè)試結(jié)果顯示,強(qiáng)毒株LY20810 F1以0.1 mL 1×10～7 cfu/mL攻毒劑量感染大口黑鱸, 30d內(nèi)魚(yú)累積死亡率為100%,而傳代弱毒株LY20810 F110在相同劑量下未造成魚(yú)死亡。強(qiáng)毒株LY20810 F1攻毒3d后引起脾臟、頭腎中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ等炎癥細(xì)胞因子顯著上調(diào),表明細(xì)菌感染引起炎癥風(fēng)暴。傳代弱毒株LY20810 F110在感染中后期(14d和28d)誘導(dǎo)包括IgM、CD4-α、CD8-α、MHCI-α等8種免疫因子的上調(diào)。免疫效果評(píng)價(jià)結(jié)果顯示,弱毒株LY20810 F110的注射、浸泡免疫(1×10～8 cfu/mL)對(duì)大口黑鱸的相對(duì)保護(hù)率分別為75.0%和66.7%,有效降低了鰤?mèng)~諾卡氏菌入侵造成大口黑鱸脾臟和頭腎的病理?yè)p傷。以上結(jié)果表明,鰤?mèng)~諾卡氏菌傳代弱毒株LY20810 F110是安全有效的弱毒疫苗候選株,將為諾卡氏菌減毒疫苗的研制提供科學(xué)依據(jù)。
